1、双脱氧链末端终止法

基本原理：
双脱氧链末端终止法通过使用链终止剂—类似于正常dNTP的2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)，将延伸的DNA链特异性地终止。

其反应体系也包括单链模板、引物、4种dNTP和DNA聚合酶。

共分四组，每组按一定比例加入一种(ddNTP)，它能随机渗入合成的DNA链，一旦渗入合成即终止，于是各种不同大小片段的末端核苷酸必定为该种核苷酸，可以从放射自显影带上直接阅读DNA的核苷酸序列。

Sanger DNA测序仪的发展历程

??1977: Sanger DNA法测序概念被提出

??1986:Hood and Smith 荧光标记ddNTP被用于电泳

??1987:第一台自动测序仪产生

??1990:毛细管电泳被应用在DNA测序上

??2003:人类基因组测序工作完成

sequencing——denaturation——annealing——extension

测序-变性-退火-扩展

基因测序相关